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BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点

发布日期:2018/1/18   浏览量:907

BCA 蛋白浓度测定试剂盒原理:


BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知,二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(biuret reaction),一价铜离子和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。


BCA 蛋白浓度测定试剂盒的特点:


1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。


2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl 。


3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween-20, 60, 80。


4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。


5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。


注意事项:


1.长期不用时,Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。


2.样品中若含有较多干扰物质时,请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。


3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


4. 常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用考马斯亮蓝(Bradford)蛋白浓度测定试剂盒。

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